由于近年来艾滋病的蔓延,过去常用的被动转移试验现已很少在临床上使用,目前体外特异性试验主要采用血清学或细胞学免疫方法进行检测,其最大优点是安全,但多数体外的免疫学检测需要特殊的精密设备,操作亦较复杂,敏感性也不如体内试验,故目前体外特异性试验主要用于临床科研,主要有以下几种方法:
1.血清学试验 血清免疫球蛋白G主要测定病人血清中针对致敏花粉的特异性IgG等抗体。常用检查方法有放射变应原吸附试验(RAST)、放射免疫吸附试验(RIST)、酶联免疫吸附试验 (ELISA)和点免疫结合试验等。
血清免疫球蛋白E主要测定病人血清中针对致敏花粉的特异性IgE等抗体。常用检查方法有放射变应原吸附试验(RAST)、放射免疫吸附试验(RIST)、酶联免疫吸附试验 (ELISA)和点免疫结合试验等。
2.细胞免疫学检查 主要检测手段是检测针对致敏花粉的特异性T淋巴细胞、嗜碱粒细胞脱颗粒试验(basophillc degranulation test)等。
根据花粉变应性哮喘的临床特征,结合当地的大气中致敏花粉飘散的时间,诊断并不困难,但要明确致敏花粉的种类则需要借助试验室的特异性检查。特异性检查包括体内试验和体外试验两大类,两者各有利弊。通常体内试验敏感性高、操作方便、简单易行,但易受患者用药的影响和可能引起过敏反应。体外试验敏感性稍差、操作复杂费时且需要特殊设备,但由于是体外试验,故绝对安全。目前国内临床上以体内试验应用较为广泛,而体外试验多用于进行临床科研。
1.皮肤点刺试验 特异性皮肤试验是英国医生Blackley于1867年首先应用于花粉症的诊断的,其在临床使用有130余年的历史,仍是目前临床广泛应用的特异性检测方法。通常将花粉变应原浸液以1∶1000(w/v)的浓度进行稀释后进行皮肤点刺试验(Prick test)或皮内试验(Intradermal test)。皮肤点刺试验的具体方法是将稀释的花粉浸液滴于皮肤上,然后用点刺针刺入附有花粉浸液的皮肤上,将表面轻轻挑破即可。皮内方法是借助1ml注射器用4号针头将稀释的花粉浸液0.01~0.02ml注入皮内即可。2种方法均在试验后15~20min根据红润反应和皮丘大小来判断结果。目前国外以皮肤点刺试验应用较为普遍,国内目前则以皮内试验法为主。两种方法均方便易行,既适合于临床上确定花粉过敏性哮喘病人对花粉过敏的种类,也适合于该病的流行病学调查。目前临床上多根据季节将花粉进行分组,采用多价花粉浸液来进行皮肤试验,如早春花粉、晚春花粉、夏季花粉和秋季花粉,每季花粉由3~5种同季的主要致敏花粉组成,但这种根据季节分组的花粉往往难以具体确定致敏花粉的种类,故准确性较差,有时可出现假阳性或假阴性,如果遇到上述可疑情况时可采用单一花粉浸液进行皮肤试验以明确诊断。
2.支气管激发试验(bronchial provocative test) 这是一种模拟花粉变应性哮喘发作的试验方法,所得结果较为可靠,当特异性皮肤试验的结果难以判定时,该试验方法可以取得较为可靠的结果,通常根据病人吸入花粉变应原浸液的浓度或数量后的肺通气指标的变化来判断结果。该方法可信性强、重复性好,可准确反映气道对某种花粉的反应性和敏感性。该方法的缺点是如果吸入花粉浸液的浓度过高或剂量过大可能诱发哮喘发作。
3.鼻黏膜激发试验(nasal mucous provocative test) 由于鼻黏膜与支气管黏膜同属呼吸道黏膜上皮,该试验的结果通常也可较准确地反映支气管的对花粉的敏感程度。与支气管激发试验相比,既安全又简便,为临床常用的试验方法之一。具体方法是将浸有花粉浸液原液的标准大小滤纸放于一侧鼻黏膜上,也可采用定量喷雾器喷入一侧鼻腔内定量的花粉浸液,另一侧鼻腔作为空白对照。在15min左右观察结果,病人出现鼻痒、喷嚏、流清涕、鼻塞、鼻黏膜苍白、水肿等症状体征时判定为阳性结果,并可根据喷嚏的多少、清涕的数量、鼻通气程度、有无喘息症状或全身症状判定阳性结果程度,通常局部反应可分为 , , ,伴哮喘症状或全身反应时可判为 。如果15min无反应,还应在4~7h观察有无迟发性反应,如果仍无反应即可判定为阴性结果。为了避免判断错误,通常应先进行空白对照试验,如果10min没有反应,则可在另一侧鼻腔进行花粉激发试验,如果空白对照试验阳性,可以改用其他试验方法。
4.眼结膜激发试验(conjunctival test) 将花粉浸液稀释后滴在眼结膜上,观察有无眼痒,流泪和充血等阳性表现。眼结膜激发试验结果可信度虽然比鼻黏膜激发试验稍差,但比特异性皮试可靠的多。眼结膜试验的优点是安全性较大,发生严重过敏反应时可通过冲洗将变应原清除。