北京协和医院
三级甲等综合医院国营
北京协和医院是集医疗、教学、科研于一体的现代化综合三级甲等医院,是国家卫生健康委指定的全国疑难重症诊治指导中心,最早承
1.溶壁微球菌平板的制备溶壁微球菌在使用前于琼脂斜面培养基上传代一次,然后再接用于普通琼脂平板37℃培养24h。用无菌蒸馏水洗下菌苔,2000r/min离心30min,弃上清。再加蒸馏水轻轻混匀,2000r/min离心30min,弃上清,称沉淀物湿重,用无菌蒸馏水配成100g/L的浓菌液(菌液应在临用前配制,不宜存放过久),加热杀死,备用。
2.称琼脂粉1g,加入的1/15mol/LpH6.4PBS100ml,即成1%琼脂。
3.取溶菌酶标准品,用1/15mol/LpH6.4PBS制成5、25、100mg/L稀释液。
4.取己配制好的菌液1ml,加到50~60℃己溶化的1%琼脂中,摇匀,倾注平板(直径7~9cm平板加1%琼脂15ml),待冷凝。
5.用打孔器在溶壁微球菌琼脂平板上打孔,孔间距18~20mm,用牙签挑去孔内琼脂。
6.用毛细吸管取唾液(新鲜收集,盛于洁净平皿内,取上层清液)或血清,加入琼脂孔内。同时在另一孔内加满标准溶菌酶作为阳性对照。
7.置25~30℃18~24h,观察结果。
8.在每批测定同时,将各种浓度的溶菌酶标准液加于小孔中,同法测定溶菌环直径,用半对数纸,以溶菌酶浓度为纵坐标(对数坐标),溶菌环直径为横坐标,绘制标准曲线。从曲线上查出每毫升待检品所含溶菌酶的微克数。
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